人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色重要性及樣品處理
更新時間：2013-05-07 點擊次數：1721
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色的重要性
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。 OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用酸終止后，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩定性，宜在規定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后，約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒檢測中樣品的處理
1．細胞培養物上清：
細胞培養物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
2．血清：
標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3．血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
4．尿液：
無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要長期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。
5．組織勻漿：
將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經過二次反復凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。
注：取樣和樣品處理過程中，防止有毒物質對操作人員的危害，要采取相應的保護措施。
